另外，37度时热应激相关基因显著表达上升的酶处理有包含伪影基因表达的危险，因此近年来，在6度低温下分离细胞的单细胞RNA序列分析得到了一些成果。在论文中被推荐。关于这一点，我们使用的胰凝乳酶等组织分解酶，在肝脏中幸运地在6度的条件下也发挥了作用。但是，肝肿瘤部的类窦结构已经崩溃，回流操作无法将酶液输送到组织中，所以用剪刀将组织进行冲洗，使酶发生反应。

根据密度梯度离心分离得到的分离，成功分离出CD49a阳性细胞

接下来，为了得到富含肝细胞的细胞分支，改变各种密度梯度液的浓度，进行密度梯度离心分离。结果显示，使用密度梯度离心剂的密度梯度液以13%的浓度进行离心分离时，出现了最多的干细胞分支。利用该划分，在免疫细胞和血管内皮细胞中，利用其表面分子进行了单细胞RNA-seq分析。但是，这种方法虽然排除了免疫细胞和血管内皮细胞，却混入了肝实质细胞和肝癌细胞。因此，根据单细胞分析的结果，鉴定出了肝细胞特异性的细胞表面分子，CD49a，并从除免疫细胞、血管内皮细胞外的细胞集团中，用细胞分组的方法分离出CD49a阳性的细胞。成功地分离了高纯度的干细胞。该方法还能分离出其他遗传性肥胖小鼠模型的干细胞，以及人类肝癌组织中的干细胞。

“今后利用这种方法，有望从各种脂肪肝模型小鼠和人类肝肿瘤组织中高效地分离出肝细胞，明确癌部和正常肝组织特异性肝细胞的性质。通过该研究，我们可以了解到癌症微环境中干细胞单个细胞水平的性质变化，将来有望识别出与癌症预防和治疗相关的分子靶标。”研究小组这样说道。

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